http://bdigital2.ula.ve:8080/xmlui/654321/2080 Fri, 10 Apr 2026 01:56:04 GMT 2026-04-10T01:56:04Z http://bdigital2.ula.ve:8080/xmlui/654321/20553 Niveles de neurotransmisores aminoacídicos durante la neurogénesis y en cultivos histotípicos de diferentes regiones del sistema nervioso central en el ratón Miranda de Contreras, Leticia Una de las principales metas en el estudio de la Neurobiología del Desarrollo es la comprensión de los mecanismos celulares y moleculares que permiten a las neuronas formar conexiones específicas y precisas con sus parejas sinápticas, es decir, una selectividad que es la base de la función apropiada de los circuitos neuronales en el sistema nervioso central (SNC) maduro. Por otra parte, el conocimiento del ensamblaje del circuito neuronal en cada región del SNC, conduce a una mejor comprensión de los circuitos locales o intrínsecos, lo cual a su vez facilita el entendimiento sobre el procesamiento de la información en cada localidad neuronal y del cerebro como una totalidad. Durante las últimas dos décadas, en nuestro laboratorio hemos trabajado en dos líneas de investigación: sinaptogénesis y cultivos primarios de tejido cerebrales. La investigación sobre la sinaptogénesis se centró en el estudio de los mecanismos ultraestructurales y bioquímicos relativos al origen y formación de las sinapsis en el SNC [Palacios-Prü y col., 1981; 1988; Miranda-Contreras y Palacios-Prü, 1995]. Por otro lado, los cultivos de tejidos cerebrales nos permitieron obtener información sobre los cambios morfológicos y bioquímicos que ocurren durante la maduración in vitro de poblaciones neuronales en diferentes regiones del SNC [Palacios-Prü y col., 1982; 1991; 1995; 1998; Miranda-Contreras y col., 1992; 1998; 1999; 2000]. De estos estudios, logramos contribuir con una valiosa información en el campo de las Neurociencias, como por ejemplo, la formulación de dos importantes hipótesis sobre la transmisión sináptica: la hipótesis del origen ribosomal de la densidad postsináptica [Palacios-Prü y col., 1981; 1988] Y la hipótesis dual de la neurotransmisión [Palacios-Prü y Colasante, 1988; 1990; Palacios-Prü y col., 1999]. En relación a los cultivos de tejidos cerebrales, fueron exitosos los trabajos de implantes en animales de experimentación de los cultivos histotípicos de hipotálamo [Palacios-Prü y col., 1994], así como los cultivos histotípicos de la cápsula suprarrenal [Palacios-Prü y col., 1995]; ambos cultivos son productores de neurotransmisores como las catecolaminas. Estos resultados nos han permitido seguir con proyectos más ambiciosos y creemos que tienen un potencial de aplicación en problemas de salud en el campo de la Medicina Reparativa. A pesar que estas líneas de investigación han resultado fructíferas, carecemos todavía de mucha información importante que nos permita una mejor comprensión de la biología molecular y celular de la sinapsis durante su origen, maduración y funcionamiento en el animal adulto. En tal sentido, nos planteamos estudiar la ontogénesis de los neurotransmisores sinápticos durante la neurogénesis en diferentes regiones del SNC, tanto in situ como in vitro. Existe una variedad de agentes químicos que actúan como neurotransmisores; la mayoría de ellos se puede clasificar dentro de una de las tres categorías: aminoácidos, aminas y péptidos. En este trabajo nos limitaremos a describir y discutir la ontogénesis de los neurotransmisores aminoacídicos: glutamato, aspartato, y-amino ácido butírico (OABA), glicina y taurina, en tres diferentes regiones del SNC de ratón: el bulbo olfatorio, la corteza cerebelosa y la médula espinal. La técnica de cultivo de tejidos neuronales histotípicos fue empleada en estos estudios como una herramienta que nos permitió determinar los niveles intrínsecos de estos neurotransmisores en cada una de las regiones estudiadas. Los resultados obtenidos en estos trabajos nos proporcionaron no solamente los niveles normales, durante el desarrollo embrionario hasta la edad adulta, de las principales sustancias neuroactivas involucradas en la maduración de los circuitos sinápticos intrínsecos del bulbo olfatorio, la corteza cerebelosa y la médula espinal, sino también una comprensión del desarrollo de las conexiones sinápticas de la neurotransmisión aminoacídica en estas regiones. Por otra parte, los cultivos histotípicos de estas regiones del SNC, caracterizados por su histotipia, citotipia y propiedades neuroquímicas, serán un modelo importante para estudios funcionales concernientes a la fisiopatología de la neurotransmisión aminoacídica, como ocurre en condiciones de hipoxia y enfermedades neurodegenerativas. Doctorado en Ciencias Médicas Fundamentales; Cota : QP364.7 M57; Biblioteca : Tulio Febres Cordero (siglas: eub); Biblioteca : Medicina (siglas: eum) Mon, 09 Jun 2003 00:00:00 GMT http://bdigital2.ula.ve:8080/xmlui/654321/20553 2003-06-09T00:00:00Z http://bdigital2.ula.ve:8080/xmlui/654321/20460 Enzimas de la glicólisis y de la biosíntesis de los esteroles de Trypanosoma cruzi : una alternativa como blancos para el tratamiento de la enfermedad de Chagas Concepción Curbelo, Juan Luis En la presente investigación se estudiaron varias enzimas importantes de la glicólisis (fosfoglicerato kinasa, hexokinasa, piruvato fosfato dikinasa y α-glicerol fosfato deshidrogenasa) y de la biosíntesis de esteroles (3-hdroxi-3-metil glutaril CoA reductasa, escualeno sintetasa, 24(25)-SMT) en varias formas de Trypanosoma cruzi y algunas en promastigotes de Leishmania mexicana, como posibles blancos para el tratamiento de la Enfermedad de Chagas y la Leishmaniasis. Todas las enzimas glicolíticas estudiadas y las de biosíntesis de esteroles fueron ubicadas en los glicosomas, aunque las enzimas de los esteroles tuvieron también una localización en microsomas/mitocondria. La ubicación de estas enzimas fue confirmada a través de tres metodologías diferentes (centrifugación isopícnica, diferencial y permeabilización selectiva con digitonina). Además, la secuencia de la hexokinasa presentó una señal de importación PTS2, en contraste con las secuencias de la tosto glicerato kinasa (PGKA y C) que no presentaron ninguna señal de importación hacia los glicosomas. La caracterización bioquímica y molecular para las enzimas de la glicólisis mostró una serie de particularidades importantes en cuanto a propiedades y constantes cinéticas (Km, Vm y Ki), con respecto a su contraparte en vertebrados. La hexokinasa se comportó como una verdadera glucokinasa con un cinética que presentó periodo de retardo, típico de enzimas histereticas y fue inhibida por PPi. En Trypanosoma cruzi se determinaron tres isoenzimas PGKs, la PGKA y C localizadas en el glicosoma y la PGKB en el citosol. A diferencia de otras PGKs en otros organismos, la PGKA de T. cruzi presentó una extensión N-terminal adicional de 80 aminoácidos. Adicionalmente, esta enzima está interactuando fuertemente con la membrana del glicosoma, a pesar de que no posee una secuencia de aminoácidos hidrofóbica como para ser una proteína de membrana, este resultado fue confirmado con Tritón X-114 y carbonato de sodio. La piruvato fosfato dikinasa fue localizada principalmente en los glicosomas y fue activada por acetil-CoA. mientras que el acetil-CoA inhibió a la PEPCK. Esta enzima debe jugar un papel muy importante en los glicosmas detoxificando a la organela del PPi producto de las rutas de biosíntesis que ocurren en el glicosoma y además generando ATP y piruvato. La PPDK estaría haciendo el rol de la pirofosfatasa, de igual forma a como se ha reportado para los peroxisomas. La α-glicerol fosfato deshidrogenasa fue localizada exclusivamente en los glicosomas de T. cruzi y esta es la primera vez que se ha reportado en estos parásitos. Esta enzima es activa solamente en un cierto estado del crecimiento de los epimastigotes, aun cuando ella esta presente sin actividad detectable a lo largo de toda la curva de crecimiento. La α-glicerol fosfato deshidrogenasa es posible que juegue un papel fundamental en mantener el balance redox en los glicosomas. La HMG-CoA reductasa, cataliza el primer paso comprometido del mevalonato y es una enzima soluble de la matriz de los glicosoma de T. cruzi y Leishmania mexicana, contrastando con las HMG-CoA reductasas integrales de membrana (retículo endoplásmico) de otros organismos. Esta enzima asociada a los glicosomas de ambos parásitos, presentaron una cinética clásica del tipo Michaelis-Menten y una fuerte inhibición por lovastatina, un inhibidor clásico de esta enzima. Este es el primer reporte de la presencia de una enzima de la biosíntesis de isoprenoides en los glicosomas. La escualeno sintetasa (SQS) cataliza el primer paso comprometido en la biosíntesis de esteroles y es una enzima unida a membranas en epimastigotes de T. cruzi y promastigotes de Leishmania mexicana con una localización subcelular dual, entre glicosomas y vesículas de microsomas/mitocondria. Los estudios cinéticos de la enzima de los parásitos mostraron que los valores de las constantes cinéticas fueron muy similares a la SQS de los mamíferos. El BPQ-OH un potente inhibidor para la enzima de mamíferos, también lo fue para la SQS de T. cruzi y Leishmania mexicana. La inhibición del crecimiento y lisis celular inducida por el BPO-OH en ambos parásitos estuvo asociado con una privación completa del escualeno y esteroles endógenos, consistente con un bloqueo en la síntesis de novo de esteroles a nivel de la SQS. Nosotros también investigamos las bases moleculares de la actividad del 4-fenoxifenoxietil tiocianato (WC-9) contra T. cruzi. Encontramos que la inhibición del crecimiento de los epimastigotes de T. Cruzi inducida por este compuesto fue asociada con una reducción en el contenido de los esteroles endógenos del parásito, debido a un bloqueo específico en la síntesis de novo de los esteroles a nivel de la SQS. Los compuestos E5700 y ER-119884 están basados en quinuclidinas. Estos compuestos fueron potentes inhibidores no competitivos o de tipo-mixtos para la SQS de T. cruzi con valores de Ki en el orden de subnanomolar en presencia de PPi. El compuesto E5700 a la concentración de IC50 presentó un potente efecto antiproliferativo sobre las formas epimastigotes y amastigotes, respectivamente, sin ningún. efecto sobre las células hospedadoras. A la MIC todos los esteroles desaparecen de los parásitos en células tratadas con este compuesto. Los estudios in vivo indican que E5700 fue capaz de suministrar una protección total contra la muerte e inhibió completamente el desarrollo de la parasitemia cuando es suministrado a 50mg/Kg.d por 30 días. Este es el primer reporte de un inhibidor de la SQS activo por vía oral, capaz de proporcionar una protección completa contra la fase aguda fulminante de la enfermedad de Chagas. La enzima 24(25) esterol Metil transferasa (SMT) fue localizada como una enzima asociada a membranas en los glicosomas y en las fracciones microsomales de epimastigotes de T. cruzi y promastigotes de Leishmania mexicana. Los valores de las constantes cinéticas fueron muy similares a los reportados para la SMT de hongos y levaduras. La enzima SMT de estos parásitos tienen una mayor afinidad por el demosterol que por el lanosterol como sustrato y el azasterol un análogo de esteroles, inhibió a la SMT (glicosomal y microsomal) de forma competitiva con respecto al demosterol y no competitiva para el AdoMet. El glicosoma de T. cruzi y Leishmania mexicana encierra enzimas de oxidación de la glucosa y de la biosíntesis de esteroles, con propiedades fisicoquímicas distintas a las de sus contrapartes en los mamíferos. Estas diferencias podrían ser utilizadas como potenciales blancos para el desarrollo de nuevos inhibidores específicos para erradicar infecciones provocadas por estos parásitos en los humanos. Doctorado en Ciencias Médicas Fundamentales; Cota : RC124.4 C65en; Biblioteca : Tulio Febres Cordero (siglas: eub); Biblioteca : Medicina (siglas: eum) Fri, 30 Apr 2004 00:00:00 GMT http://bdigital2.ula.ve:8080/xmlui/654321/20460 2004-04-30T00:00:00Z http://bdigital2.ula.ve:8080/xmlui/654321/18053 El comportamiento predador en el género Belminus: implicaciones para la subfamilia Triatominae Sandoval, Claudia Magaly Los insectos de la subfamilia Triatominae son ampliamente reconocidos por su papel como vectores del parásito Trypanosoma cruzi, agente etiológico de la enfermedad de Chagas. La principal característica biológica que define a esta subfamilia, es su obligado comportamiento hematofágico. Sin embargo, diversos trabajos en especies de Belminus vienen señalando de manera reiterada el hábito predador en este género. Debido a este peculiar comportamiento, el presente estudio se propuso como objetivos: i. Determinar en condiciones de laboratorio, algunos parámetros demográficos y reproductivos en B. ferroae alimentado con tres diferentes hospedadores (roedor, cucarachas y Rhodnius prolixus) y estimar el fltness' (ro) con cada uno, a fin de identificar el hospedador natural de esta especie; ii. Analizar la plasticidad fenotípica en B. ferroae relacionada con el hospedador, e incriminar por esta vía, el principal hospedador dentro de los domicilios con la técnica de la morfometría geométrica; iii. Ampliar el estudio morfológico de B.corredori, B. herreri y B. ferroae, a través del análisis del fenotipo antenal y del exocorión del huevo; iv. Probar la hipótesis que sugiere que las especies de Belminus podrían ser un linaje de Reduviidae en un estado temprano de adaptación a la hematofagia, esto a través de las reconstrucciones filogenéticas de la subfamilia con dos marcadores moleculares (28SD2 y el citocromo b) y el método de máxima verosimilitud. Los resultados de esta tesis revelan que los artrópodos (cucarachas), son los principales hospedadores naturales de B. ferroae, basados en un mayor fitness demográfico (ro) respecto a un hospedador vertebrado (roedor); además, se demuestra por primera vez la existencia de un Triatominae, sin un comportamiento hematofágico obligado. El análisis morfométrico de la variación en la conformación alar, permitió identificar un fenotipo relacionado con el hospedador e incriminar a las cucarachas como la principal fuente de alimento utilizada por B. ferroae dentro de los domicilios. Los estudios morfológicos también permitieron una apropiada reclasificación de los individuos a su especie y mostraron una mayor similaridad de estas especies con Triatomini, esto último mantiene correspondencia con los resultados del estudio filogenético. Ambos análisis filogenéticos fueron consistentes en recuperar al género Belminus anidado dentro de Triatominae. La tribu Bolboderini no fue recuperada con el marcador 28SD2. Finalmente, este trabajo señala el inconveniente taxonómico que representa la existencia en la subfamilia de una especie con un comportamiento principalmente predador y apunta hacia la necesidad de ampliar la definición de los Triatominae propuesta por Lent & Wygodzinsky (1979).; Triatominae are widely recognized for their role as vectors of the parasite Tlypanosoma cruzi, etiologic agent of Chagas disease. One of the main biological characteristics of this subfamily is their obligate haematophagous condition. However, several works in Belminus species showed the behavior predator of this genus. Due to this peculiar behaviour, the aims of this study were: i. To determine several demographic and reproductive parameters of B. ferroae fed on three different hosts (mice, cockroaches and Rhodnius prolixus) and relate B. ferroae fítness (as measured by rO) to the natural hosts; ii. Analyze plasticity phenotypic related to the host in B.ferroae and to incriminate the main host of B. ferroae inside the domiciles by means of the morphometric geometric technique; iii. Extend morphological analysis in B.corredori, B herreri and B. Ferroae, through antennal phenotype and the eggs study. Lastly, the hypothesis that suggests Belminus species as a Reduviidae lineage at an early stage of adaptation to haernatophagy was also tested, carrying out phylogenetics reconstructions with molecular data (28SD2 and cob b) and the maximum likelihood method. 'The present study revealed a higher demographic fítness related to the cockroach, supporting the idea that these arthropods are the main natural host of B. ferroae and showed for the fírst time the existence of a Triatominae species without obliged bloodsucking behavior. Morphometrics analyses of shape variation allowed to incriminate cockroaches like the main food source used by B. ferroae inside the domiciles. Morphological studies allowed appropriate reclassiücation of individuals to their putative species and higher similarity from this species with Triatomini. Both phylogenetics analyses were consistently recovered the Belminus genus as nested within Triatominae, but not for Bolboderini tribe. Finally, this work shows the taxonomic problem that represents the existence of a species with a mainly predator behavior in the subfamily and would point toward the need for a broader definition of the Triatominae proposed by Lent & Wygodzinsky (1979). Cota : QL523 R4S353; 2013; Doctorado; xxi, 184 hojas : ilustraciones; Biblioteca : Tulio Febres Cordero (siglas: eub) Fri, 15 Nov 2013 00:00:00 GMT http://bdigital2.ula.ve:8080/xmlui/654321/18053 2013-11-15T00:00:00Z http://bdigital2.ula.ve:8080/xmlui/654321/17305 Caracterización ultraestructural y análisis de procesos biológicos en cardiomiocitos murinos en cultivos histotípicos rotatorios Jaimes Méndez, Nancy Los cultivos primarios de miocitos cardíacos embrionarios o neonatales se han utilizado en la investigación cardiovascular por ser un modelo experimental estable, reproducible, de sencilla medición de los parámetros funcionales/estructurales y con un entorno fisiológico relativamente natural y controlado. El modelo de Cultivo Histotípico Rotatorio propuesto por Moscona, Moscona y Garber y modificado por Palacios-Prü y colaboradores, que se presenta en este trabajo posee las anteriores características, a la vez ofrece estabilidad y permite la evaluación fenotípico celular del tejido muscular cardíaco, así como la reproducibilidad determinada por el Período Crítico que corresponde a 21 días de desarrollo embrionario y 6 días de cultivo (E21-6). El análisis ultraestructural de las miofibrillas en los cardiomiocitos E21-6 revela una citoarquitectura organizada; como es la distribución de las miofibrillas ramificadas y dispuestas siguiendo el eje longitudinal de la célula e intercaladas con mitocondrias, esta conformación se relaciona con la forma alargada de los cardiomiocitos y con el aumento de la longitud de las miofibrillas; además se observa la presencia de estriaciones transversales de las sarcómeras, formando las bandas Z, A, I, H Y una pseudobanda M, así como también se evidencian fascias adherentes, binucleación y esbozos del sistema de túbulos T. El proceso de diferenciación de las miofibrillas en los cardiomiocitos es progresivo en los diferentes espacios celulares y durante el mismo se sintetizan e incorporan nuevas proteínas para mantener la estructura funcional del músculo cardíaco, indicando que la estructura de la sarcómera es dinámica. Los Cultivos Rotatorios se proponen, además, como un modelo para monitorear procesos biológicos como la síntesis de ADN y la apoptosis en condiciones experimentales. El proceso de síntesis de ADN monitoreado con la técnica de BrdU en cardiomiocitos indica que los valores promedios de síntesis de ADN es mayor en los cardiomiocitos in situ E21 (22%) e in situ P5 (16%) que en los cardiomiocitos in vitro E21 (15%). En los cardiomiocitos E21 en Cultivos Histotípicos Rotatorios se evidencia un mayor porcentaje de apoptosis (25,72%) comparado con los observados en los cardiomiocitos E21 (5,7%) Y P5 in situ (14,5%).En conclusión, el modelo de cultivo rotatorio permite a las células cardíacas E21 alcanzar después de 6 días de cultivo, las características fenotípicas de sus homólogas in situ, con mayor semejanza a los cardiomiocitos P5, indicando que las células se han adaptado a las condiciones de cultivo y han logrado restablecer una ultraestructura miotípica. Cota : QP104 J3; 2013; ix, 74 h. : il.; Doctorado; Biblioteca : Tulio Febres Cordero (siglas: eub) Thu, 12 Sep 2013 00:00:00 GMT http://bdigital2.ula.ve:8080/xmlui/654321/17305 2013-09-12T00:00:00Z