Diseño y preparación de un inmunosensor para la detección de Escherichia coli

Abstract

La Escherichia coli ha sido asociada a grandes brotes de enfermedades transmitidas por alimentos, originando políticas de detección, control y prevención basadas en estrategias de vigilancia epidemiológica y en la implementación de técnicas rápidas, sensibles y específicas. En este trabajo se realizó la detección de Escherichia coli mediante el desarrollo de un inmunosensor electroquímico, donde se ha elegido como material transductor un electrodo de hilo de oro con 99,99% de pureza. Adicionalmente, se utilizó como electrodo auxiliar o contraelectrodo un hilo de platino y un electrodo de referencia Ag/AgCl. En este trabajo se planteó la inmovilización del biorreceptor inmunológico (anticuerpos monoclonales específicos contra E. coli O 25:(K 11), O 78:(K 80),O 103:(K -), O 118:(K -), O 124:(K 72), O 145:(K -), O 157:(K -), O 164:(K -).) mediante la formación de monocapas autoensambladas de tioles sobre la superficie de oro. Se realizó la formación de la monocapa autoensamblada de tiourea sobre la superficie limpia del electrodo de oro, mediante un proceso de quimisorción oxidativa. Una vez formada la monocapa, al incubar el electrodo modificado (Au/TOU) en la solución buffer de NaH2PO4/KCl a pH ligeramente ácido (6,20), los grupos amino terminales de la tiourea permitieron la unión del anticuerpo a través de los grupos COO- del mismo, por simple atracción electrostática. Posteriormente, al agregar a la solución la cepa de Escherichia coli, ésta se unió al anticuerpo Anti-E. coli, por un proceso de afinidad específico de antígeno-anticuerpo. Los resultados obtenidospermitieron estudiar un método para la inmovilización de moléculas biológicas ensuperficies de oro modificadas. La inmovilización de los anticuerpos Anti-E. coli sobre lasuperficie de los electrodos de oro modificados mostro una buena efectividad para la unión,inmovilización y detección de Escherichia coli.