Estudio del potencial del Pleurotus ostreatus como organismo productor de un sistema lítico capáz de formar esferoplastos y lisar Saccharomyces cerevisiae

Abstract

Pleurotus ostreatus es un hongo basidiomicete, que se caracteriza por crecer sobre una gran variedad de sustratos en medios de cultivo sumergidos. El medio mineral y S. cerevisiae, es un prospecto atractivo para el crecimiento de P. ostreatus y producción del sistema lítico. Después de 9 días de crecimiento, P. ostreatus excreta su sistema lítico, el sobrenadante se obtiene por centrifugación y filtración asépticamente, en donde se evidencia su existencia por la actividad presente sobre células de S. cerevisiae 0.5 g/l inactivadas por luz ultravioleta. Las condiciones de actividad determinadas fueron obtenidas en buffer fosfato de sodio – ácido fosfórico 50 mM pH 6, temperatura 35-40°C, con una actividad entre 50 y 80 U/l. Por otro lado, se logró formar esferoplastos en células de S. cerevisiae RC-112, observaciones al microscopio muestran las diferencias morfológicas entre las células tratadas con el sistema lítico y las que no son tratadas. Utilizando 100 μl de sobrenadante contentivo de sistema lítico y una densidad celular entre 5x106 y 2x107 cel/ml se logró formar esferoplastos en un 83% en células de S. cerevisiae RC-112 en una hora, mientras que utilizando una preparación de 100 mg/ml del mismo sobrenadante liofilizado, con 50 microlitros se obtiene un 90% de formación de esferoplastos en 20 minutos. El sobrenadante liofilizado mostró actividad sobre geles SDSPAGE 7.5% conteniendo 0.4 % de células de S. cerevisiae previamente autoclavadas y liofilizadas. Al incubar el gel en las condiciones de actividad lítica determinadas por 16 horas, se observan cuatro bandas claras indicativo de actividad lítica y en geles nativos bajo las mismas condiciones tres bandas.