Ensayos de micropropagación in vitro de Cedrela odorata L

Abstract

Con el fin de estandarizar una metodología para micropropagación de Cedrela odorara L. se ensayaron varios métodos de esterilización para diferentes tipos de explantes, se evaluaron varios antioxidantes y se utilizaron métodos de propagación directa e indirecta utilizando como explantes: semillas, embriones zigóticos maduros e inmaduros y yemas apicales. El análisis de los resultados determinó que el método más efectivo de esterilización para las semillas es el hipoclorito de sodio a una concentración de 4,25% con dos gotas de tween 20 y vacío 15 minutos. Este mismo método fue igualmente efectivo para los embriones maduros, pero seguido de un tratamiento con ampicilina en dosis de 50 mg/l durante períodos de 1, 2 a 3 días. Las yemas apicales fueron esterilizadas óptimamente con HgCl2 (Cloruro de Mercurio) al 0,05% y 300 rng/l de ampicilina por 15 minutos. El medio básico fue MS (1962) suplementado con diferentes concentraciones de fitoreguladores: 2,4,D (2,4,Acido diclorofenoxiacético), AIB (Ácido Indolbutírico), TDz (Tidiazuron) y BA (Bencil,Adenina). El medio se solidificó en agar (B&T) 1%. Las porciones embrionales se incubaron, unos en oscuridad, otros a 400 - 500 lux y fotoperíodo 16/8 horas a 26 + 2 °c. Los embriones maduros en oscuridad calificaron óptimamente en 2,4,D 4 rng/l. Al ser subcultivados en un medio fresco sin hormonas se produjo rizogénesis. Los embriones inmaduros calificaron en 2,4,D, 6 mg/l y produjeron raíces en un medio fresco sin hormonas. Explantes de embriones inmaduros en AIB 0,05 mg/l y TDZ 0,10 mg/l produjeron yemas de novo directamente, las que enraizaron en el mismo medio. Aquellos explantes en TDz y AIB 0,20 rng/l: 0,10 rng/l también generaron yemas las cuales enraizaron en medio fresco sin hormonas. El porcentaje de sobrevivencia de las plantas producidas in vitro y aclimatadas 31 ambiente de invernadero fue de 100%.

In order to establish a methodology for rnicropropagation of Cedrela odorata L., (Cedro) several methods of sterilization were tested for various explants. To prevent browning, different antioxidants were probed and direct and indirect propagation methods were used, taken as explants: seeds, mature and inmature zigotic embryos and apical buds. Analysis results established that, the most effective sterilization method for seeds was sodium hypoclhrorite 4,25% with two drops of Tween 20 and vaccum 15 minutes. The same method was effective for mature embryos but only after following an antibiotic treatment with 50 mg/l of Ampicillin for 1, 2 to 3 days. Successful sterilization of apical buds was achieved with HgCl2 (Mercuric Chloride) 0,05% and 300 mg/l Ampicillin for 15 minuts. MS (1962) was used as medium with different concentrations of growth regulators: 2,4-D (2,4-diclorophenoxyacetic acid) , IBA (Indolbutyric acid), TDz (Thidiazuron) and BA (Benzyladenine). Medium was solidified on agar (B&T) 1%. The embryo explants were stored. Some were kept in the dark others in 400 - 500 lux and photoperiod 16/8 hours with 26 + 2 °c. Mature embryos in darkness produced callus in 2,4-D, 4 mg/l After excision of the callus and their transfer on MS without growth regulators development of roots was achieved. Inmature embryos produced callus on 2,4-D, 6 mg/l and roots were developed in MS without growth regulators. De novo adventitious shoots were obtained from inmature embryos explants on IBA 0,05 mg/l and TDz 0,10 mg/l wich developed roots in the same medium. Those explants on IBA 0,20 mg/l and TDZ 0,10 mg/I produced buds as well, wich formed roots on MS without growth regulators. Whether plantlets originated from germinated in vitro-seeds or shoots of inmature embryos, they acclimatized well to the greenhouse and the survival rate was 100%.