Aislamiento de una cepa de Bacillus subtilis y caracterización de su actividad proteolítica

Abstract

En la actualidad, las bacterias productoras de proteasas han adquirido especial relevancia, a que pueden ser utilizadas en procesos productivos como la industria de los detergentes, alimentos y bebidas, así como la clarificación de cerveza fría y otras bebidas, ablandamiento de carnes rojas, industrias del cuero entre otras. Una de las alternativas viables para mejorar la eficiencia, reducir los costos y aumentar la disponibilidad de algunas enzimas de interés industrial, es el de buscar y seleccionar microorganismos con altas capacidades de producción y evaluar sus condiciones óptimas de crecimiento, producción y actividades enzimáticas. El presente trabajo reporta la obtención, caracterización y purificación parcial de una proteasa proveniente de una cepa de Bacillus subtilis aislada de estiércol de oveja. Esta proteasa se purifico parcialmente con la combinación de precipitación con acetona y cromatografia de intercambio catiónico. Presento una actividad específica de 6 Ucas/mg. La actividad proteolitica fue detectada por Zimograma, donde se observo la presencia de una zona cIara de actividad alrededor de la enzima. El SDS-PAGE revela la presencia de dos bandas con pesos moleculares de ~14 y ~29 kDa. La enzima exhibió una actividad óptima a 55 o e con una estabilidad térmica a 50 °e, presentando un pH optimo a un rango de 7.0 a 9.0. La caracterización cinética de la enzima presento un comportamiento michaeliano con parámetros cinéticos Vrnax= 0.046 Ucas/min y Km= 0.192 mM. Las propiedades exhibidas por la enzima en estudio son fundamentales para la posible utilización de la enzima en diferentes procesos industriales.